豬腸道杯狀病毒RT-LAMP試劑盒使用方法:

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對照。

肌球蛋白輕鏈激酶(MYLK)重組蛋白

肌球蛋白重鏈1(MYH1)重組蛋白

肌球蛋白重鏈2(MYH2)重組蛋白

肌細(xì)胞生成素(MYOG)重組蛋白

肌原纖蛋白1(FBN1)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP12)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶15(MMP15)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶23A(MMP23A)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶23B(MMP23B)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶26(MMP26)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)重組蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)重組蛋白

基質(zhì)細(xì)胞衍生因子4(SDF4)重組蛋白

基質(zhì)重塑關(guān)聯(lián)蛋白5(MXRA5)重組蛋白

激活T-細(xì)胞核因子1(NFATC1)重組蛋白

激素敏感性脂肪酶(LIPE)重組蛋白

激肽釋放酶10(KLK10)重組蛋白

激肽釋放酶11(KLK11)重組蛋白