當從細胞庫購買的凍存或正處于增殖期的細胞，可對其進行擴增和重新凍存。不過，凍存操作可能會對細胞的生長狀態(tài)有所影響。下列實驗方案為大家提供了一份使用無蛋白成份的凍存培養(yǎng)基凍存細胞的基礎(chǔ)指南。

● 使用37°C水浴化凍無蛋白成份的凍存培養(yǎng)基或4°C條件下過夜化凍。

● 如果在水浴中進行化凍，請確保溫度不要超過37°C，也勿將該產(chǎn)品延長時間置于37°C。

● 無蛋白成份的凍存培養(yǎng)基在使用前應置于4°C條件下徹底平衡。為獲得最優(yōu)結(jié)果，推薦大家使用能夠控制變溫速率的冰箱。如果缺少能夠控制變溫速率的冰箱，也可使用細胞凍存盒。

● 如需用酶試劑解離培養(yǎng)器皿表面的細胞，則需使用對應的終止溶液重懸細胞以中和酶的效果。

● 通過離心沉淀細胞。

● 去除上清液后，使用預冷的無蛋白成份的凍存培養(yǎng)基以5x10E5至3x10E6細胞/毫升的密度重懸細胞。

● 將細胞懸液分裝至合適數(shù)量的凍存管中。

● 將細胞盡快冷卻至4°C。

● 如果使用控制變溫速率的冰箱:以每分鐘降低1°C的速率冰凍樣品，直至–40°C。之后按照每分鐘降低2°C的速率降至–90°C左右。

● 如果使用細胞凍存盒:請按照說明書來準備凍存盒。

● 為獲得最佳結(jié)果，推薦大家在細胞溫度降至–80°C后，盡快將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮儲存設(shè)備的氣相中。

● 作為無蛋白成份的凍存培養(yǎng)基的替代品，可使用該凍存細胞推薦的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清(FBS)和10% DMSO進行細胞凍存。

請注意:由于凍存設(shè)備與個人技術(shù)之間的差異，我們無法確保使用本方案凍存的細胞在復蘇后能夠保持活力，我們也無法為研究用戶實驗室凍存細胞的效果進行擔保。