技術(shù)文獻(xiàn)
技術(shù)文獻(xiàn)
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細(xì)胞株
U-2 OS, 人骨肉瘤細(xì)胞
WM451, 人黑色素瘤細(xì)胞
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細(xì)胞
C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞
UM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞癌
Hela, 人宮頸癌細(xì)胞系
HNE2, 人鼻咽癌細(xì)胞系
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細(xì)胞系
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細(xì)胞
HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系
Caki-1, 人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞
Ishikawa, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系
ACHN, 人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞
JEC, 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系
BPH-1, 人前列腺增生細(xì)胞
RL95-2, 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系
Ca Ski, 人宮頸癌細(xì)胞
MCF-7 [MCF7], 人乳腺癌細(xì)胞系
Raw264.7, 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞
GBC-SD, 人膽囊癌細(xì)胞
5637, 人膀胱癌細(xì)胞
CNE1, 人鼻咽癌細(xì)胞系
HT-29, 人結(jié)腸癌細(xì)胞
