豬痢疾（SD）的病原體是一種革蘭氏陰性的厭氧性螺旋體，先后命名為豬痢
疾密螺旋體、豬痢疾蛇形螺旋體，現(xiàn)在統(tǒng)一命名為豬痢疾短螺旋體（Brachyspira
hyodysenteriae；B．h）。由豬痢疾短螺旋體引起的豬痢疾是一種腸道傳染病，
以黏液性或黏液出血性腹瀉為特征，也被稱之為弧菌性痢疾、血痢、黑痢等。該病
在豬群中的發(fā)病率相當(dāng)高，病豬生長(zhǎng)發(fā)育受阻，耗料增加，給各地養(yǎng)豬業(yè)造成很大
的經(jīng)濟(jì)損失。本產(chǎn)品從動(dòng)物檢疫的實(shí)際出發(fā)，建立了 PCR 檢測(cè)方法，用于豬痢疾
短螺旋體的快速檢測(cè)。它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 根據(jù)豬痢疾短螺旋體 Nox 基因設(shè)計(jì)引物，引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的
PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 149 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。

運(yùn)輸及保存:

使用方法:

一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取豬痢疾短螺旋體 DNA。
二、陽(yáng)性對(duì)照
1. 為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體菌做陽(yáng)性對(duì)照，
只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 使用本陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。
最好在專門(mén)的區(qū)域操作。
三、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（25 uL 體系）
3. 在 PCR 管中加入下列成分：
成 份 樣品 陽(yáng)性對(duì)照 陰性對(duì)照
B．h 專一性引物一 2 uL 2 uL 2 uL
樣品 DNA 1-5 uL 無(wú) 無(wú)
B．h 陽(yáng)性對(duì)照 無(wú) 2 uL 無(wú)
補(bǔ)超純水到 12.5 uL 12.5 uL 12.5 uL
即用型 PCR Mix 3.0 12.5 uL 12.5 uL 12.5 uL
4. 輕柔混勻后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR。
過(guò)程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 94℃ 5 min
PCR 反應(yīng)
（30 個(gè)循環(huán)）
94℃ 40 s
55℃ 30 s
72℃ 30 s
延伸 72℃ 1 min
5. 電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 149 bp。